琼脂糖凝胶电泳的优点?
琼脂糖凝胶电泳的优点?
正确答案:
(1)琼脂含液体量大,可达98-99%,近似自由电泳,但是样品的扩散度比自由电泳小,对蛋白质的吸附极微。
(2)琼脂作为支持体有均匀,区带整齐,分辨率高,重复性好等优点。
(3)电泳速度快。
(4)透明而不吸收紫外线,可以直接用紫外检测仪作定量测定。
(5)区带易染色,样品易回收,有利于制止备。然而琼脂中有较多硫酸根,电渗作用大。
琼脂糖是从琼脂中提取出来的,是由半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖相互结合的链状多糖。含硫酸根比琼脂少,因而分离效果明显提高。
琼脂(糖)电泳常用缓冲液的pH在6-9之间,离子强度为0.02-0.05。离子强度过高时,会有大量电流通过凝胶,因而产生热量,使凝胶的水份量蒸发,析出盐的结晶,甚至可使凝胶断裂,电流中断。常用的缓冲液有硼酸盐缓冲液与巴比妥缓冲液。为了防止电泳时两极缓冲液槽内pH和离子强度的改变,可在每次电泳后合并两极槽内的缓冲液,混匀后再用。