目的基因克隆的基本方法有哪些？

正确答案：

（1）直接从染色体DNA中分离：仅适用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离，较少采用。

（2）人工合成：根据已知多肽链的氨基酸顺序，利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。

（3）从mRNA合成cDNA：采用一定的方法钓取特定基因的mRNA，再通过逆转录酶催化合成其互补DNA（cDNA），除去RNA链后，再用DNA聚合酶合成其互补DNA链，从而得到双链DNA。这一方法通常可得到可表达的完整基因。

（4）利用PCR合成：如已知目的基因两端的序列，则可采用聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）技术，在体外合成目的基因。

（5）从基因文库中筛选：首先建立基因组或cDNA文库，利用探针从文库中筛选目的克隆