平板划线分离接种细菌时，下列要求哪一项最关键
A、不能划破培养基
B、培养后必须有明显的单个菌落出现
C、必须有明显的分区划线
D、培养后绝对无污染菌落出现
E、以上都不对
正确答案：培养后绝对无污染菌落出现
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